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扫描电镜(SEM)具有分辨率高和景深长等特点，因此图像层次丰富，立体感强，能够显示细胞和组织的三维结构形貌(图12-13)，因此普遍应用于生物样品表面及其断面微细结构的观察。　　自1966年首先台商品SEM诞生以来，发展一直很快，仪器本身性能如分辨率和多功能等不断提高外，样品制备技术也不断地改进和完善。样品制备的质量是直接决定SEM能否发挥较为佳性能，并拍出理想图片的关键所在。考虑到生物样品质地柔软、容易变形、导电性差、二次电子发射率低以及含水量多等特点，在制备SEM样品时，必须掌握以下原则：　　(1)每一操作过程，都应注意防止样品的污染和损伤，使被观察的样品尽可能保持原有的外貌和微细结构；　　(2)去除样品内水份，以利于维持SEM的真空度和防止镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时，要尽量减少避免样品体积变小和收缩变形等人工损伤；　　(3)降低样品表面的电阻率，增加样品的导电性能，以提高二次电子发射率，建立适度的反差和减少样品的充放电效应；　　(4)观察组织细胞的表面或内部微结构，应注意和保护样品的观察面。　扫描电镜样品制备过程简单，不用切成薄片。内蒙古比较好的扫描电镜服务

扫描电镜离子溅射镀膜法 在低真空(0.1～0.01托)状态下，在阳极与阴极两个电极之间加上几百至上千伏的直流电压时，电极之间会产生辉光放电。在放电的过程中，气体分子被电离成带正电的阳离子和带负电的电子，并在电场的作用下，阳离子被加速跑向阴极，而电子被加速跑向阳极。如果阴极用金属作为电极(常称靶极)，那么在阳离子冲击其表面时，就会将其表面的金属粒子打出，这种现象称为溅射。此时被溅射的金属粒子是中性，即不受电场的作用，而靠重力作用下落。如果将样品置于下面，被溅射的金属粒子就会落到样品表面，形 成一层金属膜，用这种方法给样品表面镀膜，称为离子溅射镀膜法。 和真空镀膜法比较，离子溅射镀膜法具有以下优点：(1)由于从阴极上飞溅出来的金属粒子的方向是不一致的，因而金属粒子能够进入到样品表面的缝隙和凹陷处，使样品表面均匀地镀上一层金属膜，对于表面凹凸不平的样品，也能形成很好的金属膜，且颗粒较细。(2)受辐射热影响较小，对样品的损伤小。(3)消耗金属少。(4)所需真空度低，节省时间。 重庆扫描电镜公司扫描电镜(SEM)是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观形貌观察手段。

扫描电子显微镜中样本必须在真空中观察，因此无法观察活样本。在处理样本时可能会产生样本本来没有的结构，这加剧了此后分析图像的难度。由于透射电子显微镜只能观察非常薄的样本，而有可能物质表面的结构与物质内部的结构不同。此外电子束可能通过碰撞和加热破坏样本。还有，电子显微镜观察到的样本都是没有颜色的。 现在的比较新技术可以在电子显微镜中观察湿的样本和不涂导电层的样本（环境扫描电子显微镜，Environmental Scanning Electron Microscopes，ESEM）。假如事先对样本的情况比较清晰的话则可以基本上进行不破坏的观察。

SEM扫描电镜样品的制备过程如下：①取材 根据需要，切取适当大小的样品。专门的SEM备有灵活可动，范围较大的样品台，样品可大些。装在透射电镜上的扫描附件，活动范围较小，样品直径应在3～4mm左右。②漂洗 用缓冲液把组织表面洗净，否则会影响正常形态，但以快速和轻巧为宜，尽量保护组织或组织的表面结构，使其不致因不慎的操作造成人为损伤。③固定 用25～5％戊二醛固定30分钟或更长时间。Boyde建议用戊二醛固定几天到几个月，这样会增加组织的韧性，减少脱水造成的萎缩。④漂洗 用缓冲液洗3次，洗去未结合的戊二醛。⑤重固定 1％锇酸固定1～2小时。⑥漂洗 用缓冲液洗去未结合的锇酸。⑦脱水 用30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％、100％acetone或乙醇溶液各10分钟，大于1mm的样品可脱水10～20分钟。⑧干燥 一般情况下，可把脱水后的样品放在空气中自然干燥或45℃热风吹干。有些研究工作要求尽量完好保存样品表面的精细结构，可用真空干燥法、冷冻干燥法和临界点干燥法等使样品干燥。这些方法都比空气干燥法效果好，其中临界点干燥法优点多，多被研究工作者采用。　扫描电子显微镜观测电畴是通过对样品表面预先进行化学腐蚀来实现的 。

扫描电镜样品制备简单，只要将块状或粉末状的样品稍加处理或不处理，就可直接放到扫描电镜中进行观察，因而更接近于物质的自然状态。 5可以通过电子学方法有效地控制和改善图像质量，如亮度及反差自动保持，试样倾斜角度校正，图象旋转，或通过Y调制改善图象反差的宽容度，以及图象各部分亮暗适中。采用双放大倍数装置或图象选择器，可在荧光屏上同时观察放大倍数不同的图象。 6 可进行综合分析。装上波长色散X射线谱仪（WDX）或能量色散X射线谱仪（EDX），使具有电子探针的功能，也能检测样品发出的反射电子、X射线、阴极荧光、透射电子、俄歇电子等。把扫描电镜扩大应用到各种显微的和微区的分析方式，显示出了扫描电镜的多功能。另外，还可以在观察形貌图象的同时，对样品任选微区进行分析；装上半导体试样座附件，通过电动势象放大器可以直接观察晶体管或集成电路中的PN结和微观缺陷。由于不少扫描电镜电子探针实现了电子计算机自动和半自动控制，因而明显提高了定量分析的速度。扫描电镜的真空系统由机械泵与油扩散泵组成。广东推荐的扫描电镜检测

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扫描电镜样本干燥 以临界干燥法较为理想，但必须要有专门的仪器临界点干燥器。当实验室不具备此种仪器时，可采用冰冻干燥法和乙腈干燥法。乙腈干燥法的关键是乙腈置换。样品经上述处理后，浸入 520% 的乙腈溶液中，然后依次更换 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% 的乙腈溶液，每次浸泡 15-20min ，较为后再换 100% 乙腈。然后进行真空干燥。即将乙腈置换后的样品连同青霉素瓶一起放到真空镀膜台的真空装置内，抽低真空，一般需 30-50min 。样品干燥后，待其温度升至室温时再放气，取出样品。 使用扫描电镜观察细胞样品的制备方法 5 、样品导电处理 用真空喷镀法。所用的仪器为真空喷镀仪，样品被安置在离蒸发源约 10-15cm 处的样品台上，样品进行旋转活动，先喷碳。后喷金，喷镀应均匀，完成后镜下观察。 内蒙古比较好的扫描电镜服务

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