南京E1A残留DNA检测产品

qPCR法宿主细胞残留DNA检测的原理：PCR反应过程中可通过荧光标记的特异性探针检测PCR产物量。带有一对荧光分子的探针与样品中DNA通过碱基互补配对的原则结合，随着PCR反应的进行，Taq聚合酶合成DNA，同时沿5’-3’方向水解DNA探针，一对荧光分子随着探针的水解而分开，发出荧光信号。通过连续监测反应体系中荧光读数的变化，可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时，体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品构建标准曲线，由此计算样品中的DNA残留量。Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒。南京E1A残留DNA检测产品

各国药品监督管理机构对生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求：各国药品监督管理机构对生物制品中宿主细胞残留DNA的态度谨慎且明确，要求各制药企业建立详细可行、灵敏度高的检测方法，用于验证药品的纯化过程可以去除残留DNA，并对终产品的产品放行严格把关，避免携带外源DNA的药品流入市场。与此同时，残留DNA的检测方法也在不断升级和改进，研究者们旨在能够更精确更快速地检测含量较低的宿主DNA。

我国对宿主细胞残留DNA检测的规定：鉴于外源性DNA对机体的潜在危害，自19世纪末，我国药品相关机构，如卫生部、国家药品监督管理局等颁布的一系列文件中都对残余细胞DNA有明确的规定。《人用重组DNA制品质量控制要点》中要求必须用敏感的方法测定来源于宿主细胞的残余DNA含量，这对于用哺乳动物传代细胞(转化的细胞系)生产的制品尤为重要，一般认为残余DNA含量小于100pg/剂是安全的，但应视制品的用途、用法和使用对象而决定可接受的限度。 正扬生物HEK293细胞残留DNA检测方法学大肠杆菌宿主细胞残留DNA检测。

实时荧光定量PCR（qPCR）技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍，如宿主细胞残留DNA检测，鼠源、禽源等外源病毒检测，微生物快检（支原体、分枝杆菌、细菌、zhen菌等），复制型病毒检测（RCL、RCR、rcAAV等）、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现，正常扩增曲线为S型，分为基线期、指数扩增期、线性扩增期和平台期；线形光滑、拐点清晰，基线平直或略微下降，无明显上扬。定量检测实验中，对标曲的要求主要从斜率（与扩增效率相关）和R²两方面进行考察，要求斜率满足-3.8~-3.1（对应扩增效率为83.3%~110%），R²满足高于0.99。

宿主细胞残留DNA检测：南京正扬生物自主研发生产的HEK293宿主细胞残留DNA检测片段化分析试剂盒，采用荧光定量PCR法，可同步实现对残留DNA和特定大小的DNA片段的定量测定。产品针对靶标序列设计扩增不同大小产物的引物和探针，分别对扩增的4种不同大小片段设置检测体系并建立标准曲线，根据对应扩增片段的标曲计算其残留量和分布相对量，灵敏度可达到fg级别。试剂盒配有各大小片段DNA定量参考品，可与宿主细胞残留DNA样品前处理试剂盒配套使用。宿主细胞残留DNA检测有哪些必要性？

现行《中国药典》的qPCR检测法中，针对不同的疫苗，其宿主DNA残留量有不同的要求，比如基于vero细胞的狂犬疫苗，DNA残留含量要求不高于3ng/剂，基于vero细胞的脊髓灰质炎疫苗，DNA残留量不高于50pg/剂，基于CHO细胞的乙肝疫苗，DNA残留量不高于10pg/剂。因此，宿主细胞残留DNA间测对于试剂和仪器的检测灵敏度都提出了极高的要求。而要准确检测出宿主DNA残留量，则需要采用标准曲线的觉对定量方法，根据《中国药典2020》对残留DNA检测方法的要求，其标准曲线要求R2≥0.98，斜率在-3.1到-3.8范围内，每组加标样品回收率在50%-150%之间，RSD≤30%。为什么要做宿主细胞残留DNA检测？正扬生物残留DNA检测方法学

生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求。南京E1A残留DNA检测产品

宿主细胞残留DNA检测在动物源性生物材料领域的应用及要求：参考YY/T0606.25-2014《组织工程医疗产品第25部分：动物源性生物材料DNA残留量测定法：荧光染色法》中的要求，动物源性基质材料的脱细胞过程被认为是非常重要的，残留DNA定量检测是评价脱细胞过程及控制产品质量的重要措施之一。但需要留意的是在去细胞化的过程中引入的添加物如：化学试剂、核酸酶、蛋白酶等会影响产品蕞终质量，也应当引起重视。用qPCR进行宿主细胞残留DNA检测时，哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响？前处理过程杂质干扰的去除对qPCR法宿主细胞残留DNA检测结果有着较大影响。样品的前处理操作步骤对DNA检测结果的准确度影响较大，通常采用加样回收试验来进行验证并确定可接受的偏离限度，内标回收率在50-150%的范围内都可以接受。样品提取步骤较为复杂，需要特别注意，操作不当不但可能影响回收率还可能引入环境污染。南京E1A残留DNA检测产品

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