南京转染试剂公司

PLL(聚L -赖氨酸)是生理条件下带正电的多氨基酸,当链长超过20个残基时，它可以与质粒DNA结合并凝聚成致密颗粒。研究人员发现，配体在PLL上的共价附着可通过受体介导的途径***增强内吞作用。例如，涎腺样体(ASOR)是涎腺糖蛋白受体的配体，在肝细胞上表达。当ASOR共价附着在PLL上时，受体介导的内吞作用和质粒的细胞摄取***增加。此外，与叶酸或转铁蛋白相关的PLL已被开发出来，并在将pDNAs转染到*细胞中取得了实质性进展。另一种重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鸟氨酸)。PLO具有PLL的特性，但转染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton证明，与PLL相比，PLO以更低的电荷(+/−)比率凝聚pDNA，并且在相同的多阳离子/pDNA质量比下，PLO/pDNA复合物比PLL/pDNA复合物更耐破坏。然而，由于其介导内体逃逸的能力较差，带正电的多氨基酸的转染效率仍然很低。评估转染效率至关重要，特别是在需要高转染效率以保证特定下游靶标转录后调控的功能研究中。南京转染试剂公司

**近一项与抗血管生成基因传递高度相关的发现是，阳离子脂质体（CLs）选择性地靶向**的血管系统。阴离子或电中性脂质体没有发现这种作用。Campbell和他的同事[95]发现，与电中性脂质体相比，使用CLs在**血管内皮细胞(VECs)中积累更多，CLs通过添加5mol%聚乙二醇来稳定。在两种人类**类型(LS174T和MCAIV)和两个位置(颅窗和背侧皮肤褶腔)中发现了**VECs的选择性递送。**血管中囊泡的分布是不均匀的，这可能与该技术是否足以根除足够数量的**VECs以实现**消退反应有关。有趣的是，注射后24小时，脂质体上50%的摩尔电荷***增加了小鼠肺部的积聚。北京转染试剂教做小RNA和质粒DNA的共转染可用于评估转染效率。

在转染中，DNA通常通过病毒或非病毒载体(如质粒)转运到宿主细胞中。质粒的基本结构包括启动子、复制起点、多个克隆位点、目标基因和选择标记。质粒复制需要复制的起源，而多个克隆位点包含独特的内切酶切割位点，用于插入外源基因。适当的真核启动子(如CMV或EF-1a)的存在允许外源基因在宿主细胞中表达。质粒DNA可以以线性和超螺旋DNA的形式转染。与线性DNA相比，使用超螺旋质粒DNA转染通常会产生更高的效率，线性DNA更容易被外切酶降解。然而，线性化的DNA更具重组性，因此可以更容易地整合到宿主基因组中以实现稳定的转染。

PEI的分子量对细胞毒性和基因转移活性有影响。由于PEI在细胞内不可降解，所以分子量越高，细胞毒性越强。此外，具有较高分子量的PEI形成更稳定的聚合物，使其更容易转染，但更难在细胞内释放核酸。另一方面，PEI产生的复合物分子量降低，更难以转染;但它更容易释放核酸。因此，确定哪种分子量的PEI更有利是不能随意实现的。然而，一些改进使PEI在应用中更加先进。低分子量(LMW) PEI与可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶联，可***降低细胞毒性并保持较高的转染效率。通过用丙烯酸乙酯修饰胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物结构中引入带负电荷的丙酸或琥珀酸基团，可以制备出各种无毒的分支PEI衍生物。由此产生的化学物质在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。阳离子聚合物是一种非病毒载体。

共转染是将一种以上类型的核酸引入真核细胞的过程。组合的一些例子包括多个质粒DNA ,siRNA和质粒DNA ，以及多个miRNAs进入同一个细胞。通常，多质粒DNA共转染的目的是将一种以上的外源基因导入宿主细胞。其应用之一是生产由几种质粒DNA成分组成的合成病毒或杂交载体。一个例子是在HEK293细胞系中，用转移、包膜和包装载体等几种质粒载体生成慢病毒。此外，多个质粒DNA的共转染也可以应用于蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)研究，以研究一种蛋白质与另一种蛋白质之间的关系。利用外泌体途径的一种潜在方法是将脂质体核酸重新包装到外泌体中。贴壁细胞转染试剂试用

纳米颗粒，由于其在DNA转运到细胞中的保护能力，在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。南京转染试剂公司

小RNA和质粒DNA的共转染可用于评估转染效率。这可以通过引入含有荧光素酶报告基因的质粒来实现，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)识别，然后允许小RNA结合以抑制荧光素酶的表达。另一方面，在RNA干扰(RNAi)研究中，小RNA和质粒DNA的共转染也是必不可少的，以确定siRNA等特定小RNA对宿主细胞中特定基因表达的调节作用。小的非编码RNA，如siRNA，以其表观遗传调控能力而闻名，更具体地说，是转录后对特定基因表达的调控。siRNA模拟物和携带与荧光素酶报告系统相关的特定基因的质粒DNA可以同时共转染到靶细胞中。siRNA模拟物成功敲低特定基因表达将导致荧光素酶活性***降低。共转染还可能涉及不同的小分子如miRNAs，这有助于研究小RNA对靶宿主细胞的影响。例如，如果引入miRNA模拟物可以影响特定细胞类型中特定下游基因的表达，那么预计将其抑制剂序列同时转染到同一细胞中会降低单独miRNA模拟物序列发挥的转录后调节作用。与单一核酸类型的转染相比，涉及将多个核酸转移到同一细胞中的共转染通常更多挑战性更大，因为并非所有核酸类型都能有效转移，这可能取决于转染方法和所涉及的细胞类型。南京转染试剂公司