荧光染料Alexa fluor

FITC荧光标记蛋白的应用及特点:活性荧光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、罗丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于标记抗体或蛋白质功能基团，生成分子探针，并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化生物分子时，它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针，用于细胞成像、流式细胞手术、蛋白质痕迹和酶联免疫吸附实验(ELISA)。由于荧光标记物具有无放射物污染、操作简单等优点，在蛋白质功能研究、药物筛选等许多研究领域得到了越来越广泛的应用。

南京星叶生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）

且Super Fluor活化酯（与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同） Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亚胺酯荧光染料。荧光染料Alexa fluor

CY5.5-NHS荧光染料是一种广泛应用于生物标记和成像的荧光染料，CY5.5-NHS荧光染料具有优异的荧光性能。其激发波长约为675nm，发射波长约为695nm，位于红色光谱区域，这使得它在生物样本中具有较强的穿透力，能够深入组织内部进行标记和成像。此外，CY5.5-NHS荧光染料具有较高的荧光量子产率和光稳定性，可以在较长时间的激发下保持稳定的荧光信号，从而确保实验结果的准确性和可靠性。CY5.5-NHS荧光染料作为一种***的荧光染料，在生物科学研究领域具有广泛的应用前景。其优异的荧光性能、良好的生物相容性、***的适用范围以及易于合成和修饰的优点，使得它成为生物医学研究中不可或缺的重要工具。荧光素钾盐荧光染料DIR小动物成像荧光染料是一种先进的技术可以在小动物体内实时观察和研究细胞、组织的功能和代谢过程。

SuperFluor活化酯（与Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH4～10）,更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等荧光染料。1．标记效率低——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团少于4mol有以下原因：1）缓冲液中含有痕量伯铵成分，与染料反应降低了标记效率。如果蛋白已经溶于含氨基的缓冲液（如Tris或氨基乙酸），标记前用PBS透析。2）蛋白含量较低(≤1mg/mL)会影响标记效率。3）标记步骤中加入碳酸氢钠的作用是将反应混合物的pH升高至～8，因为在弱碱性环境中标记反应的效率比较高。如果蛋白溶液的缓冲范围在低pH，加入重碳酸盐也无法将pH调节至**适水平。要么加大重碳酸盐的量，要么将缓冲液换成PBS，或用0.1M碳酸氢钠透析等。4）研究显示pH升至9.0～9.4，标记效率和标记速度（只需10min）明显改善。5）不同抗体与荧光团的反应速率不同，染料标记后保留的生物活性程度也不同，因此标准步骤也不是总有比较好的标记结果。为增加标记率，可以对同一样品进行再标记，或减少蛋白的量加大染料的量重新标记。有研究者在室温孵育1小时后再4℃孵育过夜，情况有所改善。

一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料，具有广泛的应用，作为抗体和其他探针标记，用荧光显微镜，流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性，是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质（特别是抗体）的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物，以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。CY7 是一种 CY 染料。CY 为花菁 (Cyanine) 的缩写，是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。荧光染料Alexa fluor

Cy7 DiC18（DiR）是一个亲脂性、近红外荧光花青染料，这个染料常用于标记细胞质膜。荧光染料Alexa fluor

第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。荧光染料Alexa fluor