内蒙古做得好的免疫组化外包

时间：2025年03月24日来源：南京英瀚斯生物科技有限公司

目前几种常用免疫组化方法简单介绍

1）免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。

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2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。

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免疫组化结果要如何分析？

（1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，机器或人工计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。

（2）灰密度分析法。可以通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。

（3）评分法。用光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**终可以分数相加，再进行比较。对于以上这几种方法，各有利弊，请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

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免疫组化实验注意事项总结：

Ø本实验室所用切片一般是石蜡切片。

Ø烘片：使蜡片水分蒸发，石蜡软化，组织切片牢固贴在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差异。

Ø抗原修复时，使片子始终浸没在修复液中，液体不能干。

Ø一抗孵育在37度培养箱，湿盒放置1h，省时间和结合效果好，不要超过1h，容易过染。

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Ø二抗使用：两个二抗放大信号或一个二抗；若抗体信号强，可不用放大信号，尽量增大信噪比。

Ø10XDAB在常温溶解，尽可能现用现配，放于4度储存时间久了效果不佳。

Ø复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用，要区分开。

Ø加抗体和显色液时，都要将片子甩干，在半干半湿的状态下再加，不然容易造成溶液的二次稀释。

Ø整个操作过程中在显色之前，一定不能干片。

免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。关于免疫组化的常见问题汇总。